安捷伦RTCA eSight应用之细胞毒性

"您实验室的设备是否能够连续监测细胞的增殖生长，形态变化以及对相应添加物的反应？

您当前使用的技术能否满足细胞在培养箱中连续数小时、数天、数周、数月监测而不会受到干扰？

您确定当前的检测方法没有错过你想要获取的实验结果吗？

您采取什么技术手段来确保实验检测的有效性和可靠性，并最终确保研究结果的可靠性和完整性？"

实时细胞分析技术的使用正在重新定义细胞生物学的可能性和工作流程。简便性、高通量、非侵入式无标记检测和荧光标记检测的结合使研究人员能够以全新的方式和视角来监视和检测细胞的行为。

xCELLigence RTCA eSight将显微成像与实时无标记检测进行整合，实现了活细胞成像与高灵敏度生物传感技术的结合，可以满足客户同时对同一细胞群进行实时阻抗和成像检测：

1台机器 （xCELLigence RTCA eSight）

2种功能 （电阻抗检测 & 细胞成像）

3色荧光 （红red，绿green，蓝blue）

4种图像 （明场 & 三色荧光图像)

5个模块 （5个独立工作模块，互不影响）

细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法：MTT、XTT、WST-1，LDH等方法。这些测定方法的主要缺点是它们仅提供终点数据。相比之下，xCELLigence RTCA eSight可以在无任何标记物的情况下，对细胞进行全程的自动检测，可大幅缩减人员操作步骤，且确保不会错过细胞毒性反应的细微之处。

eSight应用——化合物介导的细胞毒性

Agilent xCELLigenceRTCA eSight配合eTox Green试剂，实时监测Paclitaxel对A549-Red细胞的毒性作用。A549细胞用eLenti Red试剂标记获得A549-Red，细胞核内表达红色荧光蛋白。将A549-Red以5,000 cells/well的密度接种到96x E-Plate VIEW微孔板中，培养箱孵育过夜后，加入Paclitaxel和eTox Green试剂，在Agilent xCELLigence RTCA eSight上实时检测。

（A）通过Cell Index和Bright-field Confluence参数定量分析Paclitaxel对A549-Red细胞毒性作用，呈现良好的浓度梯度依赖性，从Cell Index和Bright-field Confluence计算得到的IC50分别为24.8nM和27.7nM；

（B）A549-Red细胞在化合物处理后0小时、20小时和40小时的Bright-field、Red及Green三个通道叠加的成像图。

eSight应用——细胞凋亡

Agilent xCELLigence RTCA eSight配合eAnnexin V、eCaspase-3试剂，实时监测MG-132诱导A549-Blue细胞凋亡。A549细胞用eLenti Blue试剂标记获得A549-Blue，细胞核内表达蓝色荧光蛋白。将A549-Blue接种到96x E-Plate VIEW微孔板中，培养箱孵育过夜后，加入MG132和eAnnexin V Red、eCaspase-3 Green试剂，在Agilent xCELLigence RTCA eSight上实时检测。

（A）细胞阻抗以Cell Index反应MG132浓度依赖性细胞凋亡。

（B）基于成像分析蓝色细胞核数量，反应MG132浓度依赖性细胞凋亡。

（C）展示用 5.5 μmol/L MG132 处理A549-Blue细胞第0小时、第 20小时和第40小时的凋亡情况，白色箭头指示出现了大的细胞膜泡，其外层含有磷脂酰丝氨酸。上图为明场和红色、绿色、蓝色荧光通道叠加，下图为红色、绿色、蓝色荧光通道叠加。

通过将简单、高灵敏和客观的实时阻抗监测和高特异性的活细胞成像结合起来，eSight不增加任何用户操作的情况下，极大地丰富了细胞毒性检测反馈的信息。